Tugas Rekayasa Genetika
oleh :
Ajeng Ayu Suryani / 1600017100
Nita Yuniar Ningsih / 1600017101
UAD, Biologi B '16
Judul Jurnal '' Isolation of Genomic DNA and Construction of
Metagenomic Library From Marine Soil Sediment "
Author : R. Prabarathi dan V. Mathinavan
International Journal of Pharma and Biosciences
Tahapan isolasi DNA :
1. Tahapan Lisis
2. Tahap Ekstraksi
3. Tahap Pemurnian
Tahapan isolasi DNA yang ditemukan didalam jurnal berdasarkan diskusi
kelompok adalah :
1. Tahapan Lisis : Dilakukan dengan memasukkan 125g tanah yang telah disaring dengan jala (1/2-1/4 inci) kedalam labu 500ml dilanjutkan dengan penambahan 150ml larutan buffer lisis yang telah dipanaskan. Campuran kemudian diinkubasi pada suhu 70°C diwater bath.
2. Tahap Ekstraksi :Dilakukan dengan mendinginkan tanah yang telah diinkubasi selama 2 jam kemudian dipindahkan kedalam tabung sentrifus 500ml dan disentrifus pada 3500g selama 20 menit di suhu 4°C.
3. Tahap Pemurnian : Dilakukan dengan memindahkan lysate tanah ke dalam botol sentrifus bersih dengan 0.7 volume isopropanol. Supernatant kemudian dibagi kedalam 4 tube masing-masing 25ml dan ditambahkan 17,5 ml isopropanol. Tube kemudian diinkubasi selama 30 menit disuhu kamar. Setelah inkubasi Edna yang terpresipitasi disentrifus pada 3500g selama 30 menit pada suhu 4°C
Pellet DNA kemudian dicuci dengan menggunakan ethanol 70% dan dikering
anginkan kemudian dilarutkan didalam 5ml TE buffer.
20µl ekstrak DNA dimasukkan kedalam gel agarose 1,0% pada 100v sampai DNA
berhasil dipindahkan.
Pellet
yang telah diresuspensi kemudian dipindahkan kedalam tabung falcon pada suhu 20°C
untuk penyimpanan dalam jangka panjang.
- Prosedur pemurnian eDNA yang
digunakan adalah metode elektroelusi menggunakan Chromous Gel Extraction Kits
(Chromous Biotech, Bangalore)
-Konstruksi Metagenomic Library menggunakan Pweb-TNC ™
Cosmid Cloning Kit.